Скрининговое лабораторное исследование, позволяющее выявить фиксированные на эритроцитах аутоантитела разных классов, которые играют основную роль в разрушении клеток при гемолитических анемиях.
Синонимы русские
Прямой антиглобулиновый тест, ПАГТ, прямой тест Кумбса, прямая реакция Кумбса.
Синонимы английские
Direct antiglobulin test (DAT) with polyspecific antihuman globulin (AHG), Direct Coombs Test, Direct Anti-human Globulin Test.
Метод исследования
Реакция агглютинации.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Аутоиммунные гемолитические анемии характеризуются выработкой антител к эритроцитарным антигенам с последующим разрушением эритроцитов вследствие фагоцитоза или активации системы комплемента.
В зависимости от места, где происходит процесс разрушения эритроцитов, различают внутрисосудистый и внутриклеточный иммунный гемолиз. При внутрисосудистом гемолизе разрушение эритроцитов обусловлено прямым повреждающим действием антител при участии системы комплемента. Комплемент – это семейство сывороточных белков, которые разрушают меченные антителами клетки. Эффекторами внутрисосудистого гемолиза чаще всего являются аутоантитела класса IgM, реже IgG. Антитела фиксируют комплемент на мембране эритроцита с образованием мембраноповреждающего комплекса, формирование которого приводит к образованию большого количества пор в оболочке клетки, ее набуханию и разрушению. Антитела, вызывающие внутрисосудистый гемолиз, называют холодовыми, поскольку они наиболее эффективно связываются с антигенами эритроцитов при температуре 4-18 °С. В процессе внутриклеточного гемолиза участвуют макрофаги – специальные клетки, основная функция которых - поглощение и разрушение чужеродных и меченных антителами субстанций. Макрофаги имеют рецепторы к IgG и С3 компоненту комплемента, поэтому покрытые ими эритроциты захватываются макрофагами и разрушаются. Антитела, вызывающие внутриклеточный гемолиз, называют тепловыми, так как они наиболее эффективно связываются с антигенами эритроцитов при 37 °С.
Таким образом, в качестве лабораторных маркеров аутоиммунного гемолиза целесообразно использовать выявление фиксированных на эритроцитах антител классов IgM и IgG, а также С3 компонента комплемента. В зависимости от эффекта, который аутоантитела оказывают на эритроциты в пробирке, выделяют гемолизины (разрушают клетки) и агглютинины (вызывают склеивание эритроцитов между собой). На способности аутоантител in vitro, то есть в пробирке, вызывать агглютинацию эритроцитов и построено большинство лабораторных методик их выявления.
Современным методом постановки прямого антиглобулинового теста является реакция агглютинации в геле. Используемый в реакции полиспецифический антиглобулиновый реагент содержит антитела к иммуноглобулинy G и к С3 компоненту системы комплемента человека, а также может реагировать с IgA и IgM молекулами. В микропробирки с гелем, содержащим антиглобулиновый реагент, добавляют суспензию исследуемых эритроцитов и центрифугируют. При наличии на поверхности эритроцитов аутоантител они связываются с реагентом, что приводит к агглютинации эритроцитов между собой. В процессе центрифугирования происходит разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов. Неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета, а агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще.
Для чего используется исследование?

Для обнаружения антител к антигенам собственных эритроцитов, фиксированных на их поверхности.

Когда назначается исследование?

При выяснении причин гемолитической анемии (когда есть подозрение, что гемолиз обусловлен наличием аутоантител).
Что означают результаты?
Референсные значения
Антиэритроцитарные антитела класса IgG и C3d компонент системы комплемента на поверхности эритроцитов не обнаружены.
Отрицательный результат
Норма – клетки образуют компактный осадок на дне микропробирки.
Положительный результат
Агглютинированные клетки образуют красный слой на поверхности или в толще геля.