Исследование включает в себя определение абсолютных и относительных значений субпопуляционного состава Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD45), количества Т-регуляторных лимфоцитов (T-reg. Cells) соотношения Т – хелперы/Т – цитотоксические клетки и Т-клеток, несущих на своей поверхности маркеры активации CD38, HLA-DR. Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.
Синонимы русские
Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, Т-клетки, Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки, Т-регуляторных лимфоциты.
Синонимы английские
Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens, Human T cells, T helper cells, Cytotoxic T cells, T-reg Cells, Activation markers.
Метод исследования
Проточная цитометрия.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.Общая информация об исследовании
Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека - основной компонент в оценке иммунного статуса - выполняется методом проточной цитофлуориметрии.
Иммунофенотипирование - характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.
Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) - это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.
В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.
СD3
Этот маркер позволяет идентифицировать зрелые покоящиеся (интактные) Т-клетки и подсчитать общее количество Т-лимфоцитов. Количественная оценка субпопуляции CD3+ лимфоцитов имеет диагностическую значимость в следующих случаях:
- первичные и вторичные иммунодефициты;
- острые вирусные инфекции, включая ВИЧ;
- внутриклеточные бактериальные и паразитарные инфекционные заболевания (например, туберкулез, лепра, лейшманиоз);
- злокачественные новообразования;
- реакции отторжения трансплантатов и болезни "трансплантат против хозяина";
- лимфопролиферативные расстройства (острый Т-лимфобластный лейкоз).
При сахарном диабете довольно часто наблюдается снижение у больных процентного содержания и абсолютного числа СD3+ лимфоцитов.
СD4
Использование МКА к CD4 антигену дает возможность количественно охарактеризовать особый клон клеток, получивших название Т-хелперов/индукторов. СD4+ клетки в функциональном отношении делятся на два вида хелперных лимфоцитов: Т-хелперы 1-го порядка (Th1-клетки) и 2-го порядка (Th2-клетки). Различные CD4+ Т-клетки продуцируют разные наборы цитокинов. Th1-клетки (их называют еще клетками гиперчувствительности замедленного типа – ГЗТ) – цитокины для клеточного иммунного ответа: интерлейкин 2 (IL-2), IL-3, g-IFN, TNF-a, TNF-b, - среди которых дискриминантным цитокином является g-IFN. Th2 секретируют набор цитокинов, необходимый для гуморального иммунного ответа: IL-3, 4, 5, 6, 10, 13, TNF-b, - среди которых дискриминантным цитокином является IL-4.
Определение количества CD4+ клеток имеет значение в диагностике состояний, связанных с дефектами антителопродукции и реакций клеточноопосредованного иммунитета. Показателю числа CD4+ клеток отводится решающая роль для прогноза течения ВИЧ-инфекции.
Функциональное состояние CD4+ лимфоцитов тестируют по цитокиновому профилю: функциональная полноценность Th1-клеток подтверждается по секреции g-IFN, а Th2-клеток – по секреции IL-4.
СD8
Дифференцировочная молекула CD8 представляет собой гликопротеин, обнаруживаемый на поверхности тимоцитов и Т-лимфоцитов и участвующий в распознавании антигенных пептидов в контексте с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I.
Клиническая значимость определения количества СD8+ лимфоцитов:

вирусные инфекции (при определенной модификации имеется возможность количественной оценки вирусоспецифических цитолитических CD8+ Т-лимфоцитов);
при ряде заболеваний большое прогностическое значение имеет соотношение между CD4- и CD8-субпопуляциями Т-лимфоцитов (иммунорегуляторный индекс CD4/CD8); например, прогрессирующее снижение иммунорегуляторного индекса у ВИЧ-инфицированных больных может свидетельствовать о переходе в СПИД;
злокачественные новообразования;
оценка эффективности проведенной вакцинации (в особенности противовирусными вакцинами).

До недавнего времени приписываемая субпопуляции CD8+ клеток супрессорная активность сейчас практически полностью отвергается. По данным большинства экспериментальных и клинических исследований считается, что существование какой-либо отдельной популяции Т-супрессорных клеток, даже без привязки к CD8-маркеру, маловероятно.
При аутоиммунных тиреоидитах, в частности при диффузном токсическом зобе (ДТЗ), в реакциях клеточного иммунитета отмечается снижение субпопуляции CD8+ лимфоцитов и снижение функциональной активности цитотоксических лимфоцитов.
При сахарном диабете также отмечается уменьшение функциональной активности и количества CD8+ лимфоцитов.
Снижение фракции СD8+ лимфоцитов наблюдается также у больных с первичной хронической недостаточностью коры надпочечников (болезнь Аддисона).
Анти-HLA-DR
Молекула HLA-DR также является маркером активации и принадлежит к МНС II класса. Она представляет собой трансмембранный гликопротеин, состоящий из a- и b-субъединиц, имеющих молекулярный вес 36 и 27 кД. Анти-HLA-DR реагирует только с эпитопом HLA-DR и не имеет перекрестных реакций с молекулами HLA-DQ и HLA-DP. Он экспрессируется на В-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах, активированных Т-лимфоцитах.
Имеются данные о том, что молекула HLA-DR экспрессируется примерно на 10 % Т-лимфоцитах ПК, однако при активации клеток митогеном количество и плотность ее экспрессии резко возрастает. Существует предположение, что молекула HLA-DR на Т-клетках может выступать в качестве рецептора, участвующего в трансдукции сигнала активированными Т-лимфоцитами. Это наводит на мысль о ее возможной роли в качестве "профессиональной" АПК, участвующей в поддержании иммунной памяти.
HLA-DR также может присутствовать на клетках эпителия тимуса, на клетках В-лимфоцит-зависимых полей селезенки и лимфатических узлов, В-клеточной лимфомы. Этот антиген имеет коэкспрессию с CD1а антигеном на клетках Лангерганса.
CD25
Антиген CD25 известен как низкоаффинный рецептор ИЛ2, имеющий молекулярную массу 55 кД.
Молекула CD25, ассоциированная с b-цепью (CD122) и общей g-цепью (CD132), формирует высокоаффинный комплекс рецептора ИЛ-2. В процессе воспаления может вырабатываться растворимая форма ИЛ-2R. Маркер CD25 присутствует на субпопуляцях Т- и В-лимфоцитов периферической крови, в том числе на активированных макрофагах, НK. Его экспрессия резко возрастает при активации ФГА и КонА на поверхности CD3-активированных Т-лимфоцитов, на Т-клетках из смешанной культуры лимфоцитов, на инфицированных HTLV Т-лимфоцитах лейкемической линии при Т-лимфоцитарной лейкемии.
Метод позволяет определить количественное соотношение основных популяций Т-лимфоцитов:

Т-лимфоциты (CD3+CD19-);
Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+);
Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+);
соотношение Т-хелперы/ Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD4+/ CD3+CD8+).

малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:

активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+);
регуляторные Т-хелперные клетки (CD4+CD25brigCD45+), выполняющие иммуносупрессорную функцию
активированные цитотоксические Т-лимфоциты (CD3+CD8brightCD38+) (% от всех Т-лимфоцитов)
активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие a-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3+CD25+CD45+).

Когда назначается исследование?
Являясь реальными супрессорами, Т-регуляторные клетки играют ведущую роль во многих иммунологических процессах: регулируют Т-клеточный гомеостаз, предотвращают аутоиммунные заболевания, аллергии, гиперчувствительность, реакцию "трансплантат против хозяина". Вместе с тем регуляторные Т-клетки снижают противоопухолевый иммунитет и иммунитет к инфекциям.
Особый интерес представляют исследования, связанные с изучением соотношения аутоактивных клонов В-клеток и регуляторных Т-клеток при различной патологии воспалительного генеза. Так, при осложненном течении ряда патологических воспалительных процессов сохранение высокого уровня Т-reg и В1- клеток к 30-м суткам характеризует сохранение напряженности воспалительного процесса и, возможно, начало формирования дефекта функционирования Т-reg клеток, которое впоследствии может привести к хронизации воспаления и к развитию аутоиммунного процесса.
Таким образом, наличие и количественные характеристики этой популяции служат важным диагностическим признаком.
Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдромам.
С инфекционным синдромом:

частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
урогенитальные инфекции;
грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
рецидивирующий герпес различной локализации;
гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
генерализованные инфекции (сепсис, гнойные менингиты).

С аллергическим (атопическим) синдромом:

атопический дерматит;
нейродермит;
экзема с инфекционным компонентом;
тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.

С аутоиммунным синдромом:

ревматоидный артрит;
рассеянный склероз;
диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
аутоиммунный тиреоидит;
неспецифический язвенный колит;

С иммунопролиферативным синдромом:

опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).
Что означают результаты?
Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.
Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.




Субпопуляция лимфоцитов


Повышение показателя


Снижение показателя




T-лимфоциты (CD3+CD19-) 


• Острые и хронические инфекции;
• гормональный дисбаланс;
• длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия);
• прием биологически активных добавок;
• интенсивные занятия спортом;
• беременность;
• Т-клеточные лейкозы.


• Некоторые виды инфекций;
• иммунодефицитные состояния;
• алкогольный цирроз печени;
• карцинома печени;
• аутоиммунные заболевания;
• прием иммуносупрессивных препаратов.




Т-хелперы (CD3+CD4+CD45+)


• Ряд аутоиммунных заболеваний;
• гормональный дисбаланс;
• некоторые инфекции;
• отдельные Т-клеточные лейкозы;
• отравление солями бериллия.


• Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита);
• алкогольная болезнь печени;
• аутоиммунные заболевания;
• прием иммуносупрессивных    препаратов или стероидов.




Т-цитотоксические лимфоциты  (CD3+CD8+CD45+)


• Некоторые вирусные инфекции;
• ряд Т-клеточных лейкозов;
• наркоз;
• острая фаза аллергии;
• ряд аутоиммунных патологий.


• Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний;
• иммуносупрессивная терапия.




T-reg. (регуляторные Т-клетки (CD4+CD25brightCD45+)


• Различные новообразования;
• лимфопролиферативные процессы;
• инфекционные заболевания.


• Аутоиммунная патология
(сахарный диабет 1-го типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, миастения);
• аллергические заболевания (бронхиальная астма, атопический дерматит, пищевая аллергия).




Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+)


• Инфекции;
• аутоиммунная патология;
• аллергия;
• онкологические заболевания;
• алкогольный цирроз печени;
• беременность.


Не имеют диагностического значения.




В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.